Приготовление спорового отпечатка - документ. Получение споровой взвеси - клубы по интересам Изготовление споровой взвеси

18.09.2021

Руководство по выращиванию грибочков.

Москва 2004

1 часть

Набор гровера. Инструменты, препараты т.д. 3

Изготовление отпечатка 4

Изготовление споровой взвеси. 5

Подготовка банок. 6

Подготовка субстрата. 10

Инокуляция субстрата.14

Уход за банками.16

Приготовление покровного грунта. 21

Покров. Подготовка парника. 27

Плодоношение. 29

2 часть

Выращивание мицелия в жидкой среде. 33

Набор гровера. Инструменты, препараты и т.д.

Всё что нужно для выращивания грибочков в соответствии с изложенной далее инструкцией.

Название инструмента	Кол-во	Отметка о наличии	Предполагаемое место покупки
Банка 720-800 мл. с накручивающейся крышкой	4 шт.		Хоз.маг. Или купить огурцов и закусить ими водку
Крышечка от пластиковой бутылки	1 шт.
Простой карандаш	1 шт.
Нож, ножницы	1 шт.
Отвертка для загибания краев дырки для клапана	1 шт.
Бинт, шириной 12 см.	1 шт.
Вата	1 комочек.
Зерно пшеницы	0.5 литра		Мир сои на 6-й парковой
Кастрюля для варки зерна	1 шт.
Столовая ложка	1 шт.
Скороварка	1 шт.
Спирт	5-10 пузырь.
Шприц 10 мл.	5 шт.		Аптека
игла для шприца	10 шт.		Аптека
Зажигалка Criket	3 шт.		лоточки табак
Перчатки резиновые	10 пар		Аптека
Вермикулит	2 пакета		цветы на 16-й парковой
Торф	Вермикулит Х 2		цветы на 16-й парковой
Контейнер для продуктов 1.1 л.	3 шт.		Хоз.маг.
Фольга	2 рулона		оптовка
Мелкий керамзит			цветы на 16-й парковой
Пищевая пленка	1 рулон		оптовка
Любое лекарство для капельницы в бутылочках 400 мл.	5 бутылочек		Аптека
Фруктоза	100 гр.		Мир сои на 6-й парковой
Чашка петри	10 шт.
Мерный стакан для жидкостей и сухих продуктов (зерна)	0.5 л.		лабораторная техника на 3-й парковой
Террариум	1 шт.		Зоо магазин на 3-й, 5-й, 9-й или 13-й парковой

Предполагается изготовление своего отпечатка, при покупке оного - следующую главу можно пропустить.

Изготовление отпечатка.

Необходимо.

Гриб!!!
Бритва (нож).
Спирт.
Пинцет.
Чашка Петри (по кол-ву грибов).

Процесс.

Продезинфицировать чашку Петри, пинцет, бритву.
Держась за ножку, шляпкой вниз, отделить шляпку от ножки.
Пинцетом положить шляпку в чашку Петри, спорами вниз.
Закрыть, оставить на 24 часа.
Изъять шляпку, закрыть чашку.

Изготовление споровой взвеси.

Необходимо.

Отпечаток в чашке Петри.
Шприц.
Спирт.
Пакетик с зип-локом.
Кастрюлька для варки зерна.

Процесс.

Спиртом продезинфицировать пакет.
Вскипятить воду в кастрюльке.
Набрать в шприц.
Подождать пару минут.
Вылить из шприца в сторону.
Набрать снова полный 10 мл. шприц.
Убрать шприц в пакет, отложить остывать.
Как в пункте 3,4 продезинфицировать еще 2 шприца.
После остывания, вылить всю воду из шприца в чашку Петри, перемешать им же.
Набрать в 3 шприца примерно по 3.5 мл. закрыть колпачками иглы.
Убрать шприцы в чистые зип-лок пакеты.
Инокуляцию проводить минимум через 12 часов.

Подготовка банок.

В нашем случае, будут использоваться 720 мл (800 г) банки, из-под огурцов, или помидоров. (Подойдут любые похожие банки, необязательно использовать именно такие).

Снимаем металлическую крышку и, используя любой предмет округлой формы, (например крышку от бутылки), очерчиваем на ее поверхности круг, диаметром 20-30 мм.

Затем, используя обычные ножницы, вырезаем в крышке отверстие.

После того, как мы вырезали отверстие, необходимо загнуть его края внутрь. Это можно сделать тупым, деревянным предметом, например скалкой, или ручкой от чего-либо, прилагая усилия в двух направлениях, (вниз и вбок).

Если все сделано правильно, должно получиться что-то вроде этого.

Изготовление ватно-марлевого тампона.

Теперь необходимо изготовить ватно-марлевый тампон.

Для этого отрезаем бинт или кусок марли (бинт должен быть довольно широким, 10-12 см), и складываем его в два слоя.

Кладем на бинт кусок ваты (ваты должно быть много, чтобы тампон получился достаточно плотным).

Поднимаем края бинта, и перевязываем их веревкой (если используется нитка, то ее необходимо сложить в несколько слоев).

После этого, обрезаем излишки бинта и веревки.

Готовый тампон, вставляем в проделанное нами отверстие,в крышке банки.

Тампон необходимо вставить таким образом, чтобы с обеих сторон крышкион выступал одинаково, (т.е. необходимо расположить крышку примерно по центру тампона).

осле того, как мы вставили тампон в отверстие, необходимо, одновременно, сильно прижать его ладонями сверху и снизу. Это делается для того, чтобы края тампона заходили дальше краев отверстия, что в свою очередь, предотвратит попадание бактерий через зазор между тампоном и крышкой.*

*Для того чтобы исключить попадание бактерий, тампон должен быть плотным, чем плотней он будет, тем меньше вероятность проникновения бактерий (но перебарщивать тоже не стоит, иначе воздух не сможет проходить сквозь тампон). Тампон делают, примерно в 1.5 раза большего размера, чем размер отверстия, в которое он будет вставляться.

Банка с тампоном выглядит так:

Подготовка субстрата.

Зерно необходимо предварительно отварить.

На каждую используемую нами банку, потребуется 150-170 мл (не грамм) зерна. Необходимое количество, легко определить, используя для этой цели мерный стаканчик.

Зерно, насыпаем в кастрюлю или ковшикв том объеме, который потребуется для приготовления необходимого нам количества банок.

Заливаем водой.

И ставим вариться на плиту.

Варить зерно до готовности*, нужно примерно 30-40 мин. (все зависит от количества).

*Зерно считается готовым тогда, когда на поверхности появляются отдельные, разваренные зерна, их должно быть немного, примерно 5-7% от общей массы.

Вода к этому времени, практически полностью выкипает.

После того, как зерно сварилось, его необходимо промыть холодной водой.

начала вода будет мутно-коричневой, а потом станет совершенно прозрачной. Это делается для того, чтобы зерно не слипалось.

Затем воду нужно полностью(!) слить, а зерно разложить по банкам.

Если все сделано правильно, зерно будет занимать, примерно 1/2 объема банки.

Теперь, банки с зерном, необходимо стерилизовать. Для стерилизации лучше использовать скороварку, но также подойдет и обычная кастрюля.*

*Перед стерилизацией, на дно кастрюли, необходимо положить кусок тряпки, или использовать какую-нибудь другую “подставку” (например, перевернутую тарелку), для того, чтобы банки не соприкасались с дном кастрюли, и не лопнули во время стерилизации. Воду в кастрюлю, следует наливать таким образом, чтобы она закрывала нижнюю часть банок, и чтобы она не выкипела за то время, пока банки будут стерилизоваться.

Оптимальное время стерилизации 1 час.

Банки лучше не вынимать из скороварки или кастрюли до тех пор, пока они полностью не остынут. Если банки вынуть сразу же после стерилизации, из-за разницы давления, они начнут затягивать в себя холодный воздух, а это может привести к тому, что вместе с воздухом, внутрь банки попадут микроорганизмы, которые в дальнейшем могут вызвать заражение субстрата.

После стерилизации, банки с субстратом должны остыть до комнатной температуры, (инокуляцию лучше проводить спустя сутки (гарантированный срок) после окончания стерилизации).

После стерилизации, зерно еще немного увеличилось в размере, и теперь занимает примерно 2/3 от объема банки.

Нигде в банке, не должно присутствовать ни какой свободной воды, а зерно должно выглядеть сухим и при постукивании кулаком по банке, легко рассыпаться на отдельные зерна.

Если все так - значит, все было сделано правильно.

Инокуляция субстрата.

Инокуляция готовым шприцом со споровой взвесью.

Если вы используете уже готовый шприц со споровой взвесью, то процесс инокуляции не должен вызвать особых проблем.

Благодаря тому, что субстрат и споровая взвесь остаются в герметично закрытых емкостях, для проведения инокуляции не требуется предварительная стерилизация помещения, в котором вы будете проводить работы. Так же можно обойтись без применения резиновых перчаток и марлевой повязки на лицо (хотя конечно, все эти меры предосторожности,существенно снижают риск заражения субстрата).

Берем банку и обильно смачиваем тампон спиртом, но так, чтобы спирт не начал капать на зерно.

После этого, берем приготовленный шприц со споровой взвесью, и прокаливаем иглу над пламенем горелки.

Иглу необходимо прокалить докрасна.

Затем опускаем иглу в банку со спиртом, (это делается для того, чтобы остудить иглу и не прожечь ей тампон).

И тут же, прокалываем смоченный спиртом тампон* и впрыскиваем некоторое количество споровой взвеси в банку с зерном. Для инокуляции одной банки, достаточно 2-3 мл споровой взвеси.

*Следите за тем, чтобы игла прошла тампон насквозь, и ее кончик показался внутри банки. Если этого не произойдет, то все споры окажутся в тампоне.

Если по каким-либо причинам тампон проколоть не удается, инокуляцию можно провести, аккуратно приоткрыв крышку банки (перед инокуляцией банку необходимо протереть спиртом).

Уход за банками.

После инокуляции, банки с зерном необходимо убрать в темное и теплое (25-30С) место. Поскольку присутствие света даже в небольших количествах тормозит развитие мицелия, если у вас нет возможности убрать банки в темное место их следует обернуть фольгой или каким-нибудь другим светонепроницаемым материалом.

Через 2-3 дня после инокуляции, (если инокуляция прошла успешно), кусочек агара начнет обрастать пухом мицелия, а в местах соприкосновения с зерном мицелий начнет перебираться на субстрат.

Мицелий растет довольно быстро и с каждым днем осваивает все большую поверхность субстрата, перебираясь по зернам и образовывая полностью заросшие участки.

Как только мицелий начал активно распространяться по субстрату, и появились полностью обросшие участки из нескольких зерен, субстрат можно “перетряхнуть”.

Во время перетряхивания, обросший мицелием участок субстрата разбивается на отдельные зерна, которые, попадая в новые места, образуют сразу несколько новых очагов развития мицелия - это существенно сокращает время освоения мицелием субстрата, и способствует более равномерному его зарастанию.

Но, поскольку большая часть зерна еще не обросла мицелием и риск ее заражения еще слишком велик, перетряхивать субстрат следует очень аккуратно. При перетряхивании, нужно следить за тем, чтобы зерно как можно меньше касалось крышки банки и самого тампона. В этих местах могут находиться посторонние микроорганизмы пробравшиеся “из вне” которые могут привести к заражению субстрата. Следует не “трясти” банку из стороны в сторону, а удерживая её в одной руке, другой рукой наносить удары по нижней части банки.

Таким образом, субстрат будет перемешиваться внизу банки, почти не попадая в ее верхнюю часть.

Сразу после перетряхивания субстрата, зёрна обросшие мицелием теряют свою “пушистость” и их практически невозможно отыскать в общей массе.

Но уже через 1-2 дня на некоторых зёрнах, становятся видны белые точки мицелия, которые быстро увеличиваются в размере и перебираясь на соседние зерна завоевывают новые территории.

Через несколько дней, мицелий разрастается по субстрату и снова образовывает полностью заросшие участки.

Когда это произошло, перетряхивание субстрата следует повторить.

С каждым новым перетряхиванием субстрата, очагов развития мицелия становиться все больше.

И зарастание происходит все быстрее.

Для полного обрастания субстрата мицелием, обычно требуется 3-5 недель, в зависимости от температуры окружающего воздуха.

Чем меньше остается неосвоенного мицелием субстрата, тем меньше риск его заражения при перетряхивании.

Но все равно, перетряхивать субстрат следует как можно аккуратней, т.к. если заражение все-таки произойдет, субстрат придется выбросить, а банку придется заново стерилизовать. И будет очень обидно, если это случиться уже в самом конце колонизации субстрата.

Если заражение субстрата все же произошло, субстрат из этой банки необходимо выбросить. Некоторые виды плесени содержат токсины и могут быть очень опасны для здоровья человека. Поэтому зараженный субстрат проще выкинуть и приготовить все заново.

Нормальный цвет мицелия - белый, допускаются лишь белый цвет с легким голубоватым или желтоватым оттенком. Нормальный запах мицелия - грибной, но запах мицелия практически не чувствуется, его можно почувствовать либо сразу после перетряхивания субстрата (уже на завершающей стадии, когда почти все зерно обросло мицелием), либо при перекладывании субстрата из банки в контейнер. Все другие цвета и запахи - признак заражения субстрата.

Полностью обросшее мицелием зерно выглядет так:

После того, как субстрат будет полностью(!) колонизирован мицелием, его можно пересыпать в контейнеры для стимуляции плодоношения.

Приготовление покровного грунта.

Покровный грунт готовится из смеси торфа и вермикулита в соотношении 2 / 1 соответственно.

Берем подходящую емкость и насыпаем в нее 2 части торфа.

Затем туда же насыпаем одну часть вермикулита.

Затем все это перемешиваем до получения однородной массы.

Теперь покровный грунт необходимо увлажнить. Для этого добавляем в нашу смесь воду. Обычно для достижения оптимальной влажности, воды требуется примерно столько же, сколько вермикулита (1 часть), может быть чуть больше.

Тщательно перемешиваем до получения однородной массы.

Влажность покровного грунта легко проверить, сжав его в кулаке. Если при этом между пальцами выступают капли воды - значит влажность оптимальная, если капли не выступают - воды следует немножко добавить, если вода вытекает ручьями - в смесь следует добавить вермикулита, либо торфа (вермикулит лучше впитывает влагу).

После того, как смесь приготовлена, покровный грунт необходимо стерилизовать. Для этого накладываем его в банку.

Закрываем банку крышкой (крышку можно закрывать плотно, поскольку покровный грунт довольно рыхлый, при избыточном давлении банка не взорвется).

Ставим ее в скороварку.

И стерилизуем в течение 30-60 минут. После стерилизации, покровная смесь должна остыть до комнатной температуры, (использовать покровный грунт, лучше спустя сутки после окончания стерилизации).

Покров.

Теперь, нам необходимо пересыпать обросший мицелием субстрат в пластиковый контейнер и "укрыть" его покровным грунтом.

Все операции необходимо проводить в стерильных условиях, работая в резиновых перчатках и марлевой повязке. Все рабочие поверхности перед началом работы необходимо протереть спиртом.

В нашем случае будет использоваться обыкновенный, пластиковый контейнер для пищевых продуктов емкостью 1.1 л.

Протираем контейнер спиртом (изнутри и снаружи).

Затем, предварительно протерев спиртом банку с субстратом, открываем крышку* и высыпаем зерно** обросшее мицелием в контейнер.

*Для того, чтобы крышка банки легко открылась, ее необходимо отвернуть заранее, а потом неплотно прикрыть и протереть спиртом.

**Для того, чтобы зерно легко высыпалось из банки, зерно необходимо предварительно "разбить" (т.е. проделать то же самое, что и при перетряхивании субстрата).

Затем, разламывая крупные куски мицелия, более-менее выравниваем поверхность.

После этого, предварительно протерев спиртом банку с покровным грунтом, "укрываем" субстрат, насыпая грунт слоем 2-3 см.

Не прижимая грунт (!) более-менее выравниваем поверхность.

Покровный грунт должен выглядеть “воздушным” и не образовывать крупных комков, если комки все же присутствуют их необходимо удалить, либо просто измельчить. Мицелия, не должно быть видно на поверхности покровного слоя. Если это вдруг произошло, присыпьте это место грунтом.

Теперь необходимо обернуть контейнер фольгой. Удобней всего, проделывать это в следующей последовательности: Расстилаем фольгу, ставим на нее контейнер и оборачиваем его сверху.

Затем отрезаем фольгу от рулона и загибаем ее с одной стороны.

После этого поднимаем все края и загибаем их к верху.

Теперь контейнер(ы) необходимо убрать в темное и теплое место сроком на 1 неделю. Поскольку фольга не пропускает свет, контейнеры достаточно поставить в помещение с температурой 25-30С. Через неделю, мицелий пробьется сквозь покровный грунт, и контейнер можно будет выставлять в парник, для начала плодоношения.

Подготовка парника.

В нашем случае, в качестве парника будет использоваться обычный террариум, который продается в любом зоомагазине. Почему террариум? Потому что его конструкция, не требует практически никаких доработок, и вместе с тем отвечает всем предъявленным ей требованиям.

Террариум очень удобно открывается, в него можно установить до 6 контейнеров (необходимо подобрать по размеру), у него прозрачный верх отлично пропускающий дневной свет, а также имеется несколько технологических отверстий, которые можно использовать по своему усмотрению (например для автоматизации системы вентиляции и(или) увлажнения).

Перед использованием, террариум необходимо тщательно вымыть.

Если вы не собираетесь использовать автоматическую систему вентиляции и увлажнения, то технологические отверстия лучше закрыть фольгой.

На дно террариума насыпается мелкий керамзит, (предварительно тщательно промытый), слоем 1-2 см.

После того как мы насыпали керамзит, его необходимо разровнять.

Затем в террариум необходимо налить воды так, чтобы слой керамзита оказался погруженным в воду примерно наполовину, (т.е. чтобы уровень воды доходил примерно до середины керамзитового слоя). Таким образом, достигается наиболее эффективная площадь поверхности, для максимального испарения воды.

В крышке террариума установлена съемная вентиляционная решетка, (чтобы животные находящиеся в террариуме могли свободно дышать) для создания парника, ее необходимо обернуть 2-3 слоями пищевой пленки по всей поверхности. Пищевая пленка надежно удерживается на решетке, на протяжении всего периода эксплуатации террариума, не позволяет влаге испаряться и прекрасно пропускает свет. Щели, которые остаются в местах крепления решетки к крышки террариума, закрывать не нужно, они создают дополнительную циркуляцию воздуха и обеспечивают необходимую вентиляцию парника.

Увлажняют парник, путем разбрызгивания воды из обыкновенного хозяйственного распылителя на крышку террариума. Такое увлажнение необходимо проводить 2 раза в день (утром и вечером). Дополнительно подливать воду в террариум нет необходимости. Избытки влаги, скатываясь с крышки террариума, собираются внизу и вновь испаряются благодаря увеличенной за счет керамзита поверхности.

Плодоношение.

Спустя неделю после покрытия (неделя - это оптимальный срок, подобранный опытным путем) достаем наш контейнер(ы) и снимаем фольгу. Проще не разматывать фольгу, а вырезать верх ножом или скальпелем (процедура напоминает открывание сметаны). ;)

К этому времени, мицелий должен местами показаться на поверхности покровного слоя. Если мицелия на поверхности слишком много, это значит, что, либо контейнер стоял дольше недели, либо толщина покровного слоя была меньше 2-3 см.

Еще раз хочу напомнить, что и толщина покровного слоя, и время отведенное на фазу активного роста мицелия в покровном слое, были подобраны мной опытным путем, в течение довольно длительного времени и являются, на мой взгляд, оптимальными.

Мицелий должен только-только начать пробиваться сквозь покровный слой.

Устанавливаем наши контейнеры в террариум.

И предварительно увлажнив, закрываем крышку.

Теперь, террариум необходимо установить в таком месте, где будет присутствовать дневной свет, но где на него не будут попадать прямые солнечные лучи. Наиболее подходящим, является место не вдалеке от окна.

Через несколько дней, мицелий пробивается практически по всей поверхности покровного соля.

Затем рост мицелия как бы замедляется, и на его поверхности начинают появляться круглые уплотнения - примордии.

Буквально на следующий день, в этих уплотнениях уже можно различить шляпку и ножку будущего гриба.

Террариум следует продолжать проветривать и увлажнять дважды в день (утром и вечером).

Если температура и влажность в парнике оптимальные, то грибы развиваются довольно быстро.

И уже за 2-4 дня вырастают до размера 5-10 см. (зависит от вида грибов).

Собирать грибы следует в тот момент, когда вуаль прикрывающая спороносный слой, у большинства грибов начинает рваться.

После этого момента, грибы визуально все еще продолжают расти, но роста грибной массы уже не происходит. Одновременно с разрывом вуали снижается и количество психоактивных веществ содержащихся в теле гриба.

Поэтому, если вы не планируете изготавливать споровый отпечаток, грибы необходимо собирать тут же, после разрыва вуали.

Выращивание мицелия в жидкой среде.

В любой аптеке покупаем любое лекарство для капельницы. Лекарство продается в 400 мл. и 200 мл. стеклянных бутылочках с резиновой пробкой.

Так выглядит эта бутылочка:

Должно получиться вот так:

Затем с помощью двух иголок и одного шприца (желательно большого объема), выкачиваем содержимое бутылочки. Пользоваться удобнее именно двумя иголками, и не высасывать жидкость из бутылочки, а наоборот, заполнять бутылочку воздухом. В результате избыточного давления, жидкость полностью удаляется из бутылочки в течении нескольких минут.

Естественно, чтобы жидкость вытекала, бутылку нужно перевернуть вверх ногами.

После того, как вся жидкость удалена из бутылки. Закачиваем в бутылку, примерно 100 мл. чистой воды и энергично трясем. Это делается для того, чтобы промыть бутылочку и окончательно избавиться от остатков лекарства. Проделать эту процедуру лучше 2-3 раза.

Теперь мы готовим питательный раствор. Раствор можно приготовить и из меда, но, на мой взгляд, удобнее использовать фруктозу. Во-первых, проще контролировать концентрацию раствора, отмеряя нужное кол-во вещества, во-вторых, раствор абсолютно не имеет цвета, (что облегчает обнаружение мицелия:)), к тому же, фруктоза продается везде и по своему составу, она совершенно одинаковая, а также, фруктоза может храниться довольно длительный промежуток времени, без видимых изменений.

Для приготовления раствора необходимо полностью растворить фруктозу в воде. Рекомендуемая концентрация 2 грамма фруктозы, на 100 мл. воды. Повышенные концентрации фруктозы в растворе, приводят к образованию более «жидкого» мицелия, то есть при приготовлении 4 % раствора фруктозы, мицелий, даже через длительный промежуток времени, будет легко засасываться в шприц через иглу. А при пониженных концентрациях, например, при приготовлении 1 % раствора фруктозы, мицелий, через некоторое время, будет образовывать довольно плотные сгустки, которые очень трудно втягиваются через иглу, но зато в таком виде, мицелий дольше хранится.

Раствора, следует приготовить около 300 мл. (если используется бутылка емкостью 400 мл.). Если используется бутылка меньшего объема, то раствора следует приготовить примерно на 2/3 от объема бутылки. Не следует заполнять бутылочку раствором «под завязку», так как при дальнейшей стерилизации, в результате нагревания, алюминиевый ободок который удерживает пробку, может не выдержать. Далее, закачиваем раствор в бутылочку. Для этого также, лучше использовать две иглы и один шприц. Вторая игла, позволит воздуху выходить из бутылки, не образовывая избыточного давления. После того, как мы залили раствор в бутылку, ее следует простерилизовать.

Стерилизовать бутылочку, можно как в кастрюле, так и в скороварке. Единственное условие, стерилизацию следует проводить, не более 30 мнут, иначе может произойти карамелизация фруктозы, и на ней ничего не вырастет.

После стерилизации, даем бутылочке остыть, до комнатной температуры. И только после полного остывания, производим инокуляцию споровой взвесью. Затем помещаем бутылочку в теплое (~ 25C), темное место и ждем результатов. По прошествии 24-48 часов, обычно начинается бурное разрастание мицелия. Но в некоторых случаях, первые признаки разрастания мицелия проявляются лишь на 5-7 день. В любом случае, неделя - контрольный срок, если за это время ничего не произошло, и раствор по-прежнему, абсолютно прозрачный, стоит все переделать заново.

Хранить мицелий, выращенный таким способом, следует в холодильнике. Для длительного хранения этот метод не подходит. Максимальный, гарантированный срок хранения: 2 месяца.

Основы работы с агаром

Что такое агар и где его достать

Процедура приготовления

Инокуляция

Инкубация

Хранение культур

Выделение чистой культуры

Удаление очага заражения

Пересадка мицелия

Агар (устаревшее название агар-агар) - продукт, получаемый из красных и бурых водорослей (таких как Eucheuma spinosum Ag., E. gelatinae Ag., Gelidium cartilagineum (Grev. и др. ) и образующий в водных растворах плотный студень. Представляет собой белый, похожий на муку порошок.

Состоит в основном из полисахаридов. Применяется в составе питательных сред для культивирования бактерий, грибов, водорослей, а также в кондитерской промышленности, при производстве желейного мармелада, желе, пудингов, мясных и рыбных студней, и т.д.

Биологический (лабораторный) агар отличается от пищевого более высоким качеством, стоимость пищевого агара при этом намного ниже. При использовании в домашних условиях, качество агара является не столь значимым, поэтому есть смысл, брать именно агар используемый в кондитерской промышленности.

Пищевой агар разделяется по плотности, например: Агар М 500, Агар G 700, Агар -900, и т.д. Чем больше число в названии, тем большей вязкостью / плотностью будет обладать полученный гель / студень. Пропорционально увеличению плотности, уменьшается расход агара, но при этом увеличивается его цена.

Если плотность агара неизвестна, его расход можно подобрать экспериментальным путем, получив среду напоминающую по консистенции мармелад. Если среда будет слишком мягкая, Вам будет неудобно переносить отрезанные кусочки.

Найти где продается агар, можно на сайте журнала товары и цены , набрав слово "агар" в строке поиска.

Для выращивания мицелия высших базидиомицетов используются различные питательные среды на агаровой основе. В зависимости от выращиваемого вида, а так же от поставленных целей, питательные среды могут различаться по составу, уровню Ph, вязкости и т.д.

Не будем подробно останавливаться на приготовлении сложных агаровых сред, кому интересен этот вопрос, без труда сможет отыскать необходимую информацию в соответствующей литературе. Рассмотрим приготовление двух самых простых, и в тоже время, подходящих для выращивания огромного количества видов грибов, питательных средах - среды на зерновом, и среды на картофельном отваре.

2 часть

Питательная среда из зернового отвара

Состав: Зерновой отвар* -100 мл**; агар - 1,5 г.***

* Можно использовать отвар, который остается у Вас после приготовления зерна (если Вы используете зерно в качестве субстрата), но только если зерно варилось без добавления Н2О2. В противном случае, агар попросту не застынет.

**Расход среды на одну 100 мм чашку Петри ~ 30-50 мл.

*** При использовании девятисотого агара.

Процедура приготовления

Берем около 100 мл зерна (пшеница, рожь, ячмень, овес и т.д.),

высыпаем в емкость,

ставим на газ,

доводим до кипения,

За это время часть воды выкипит, а оставшаяся часть окрасится в приятный, темно-коричневый цвет.

Получившийся отвар необходимо профильтровать. В качестве фильтра можно использовать сложенную в несколько слоев марлю, или хлопчатобумажную ткань. Их укладывают в сито или воронку и аккуратно выливают отвар.

Зерно и мелкие частицы, оставшиеся на фильтре выбрасывают.

Если количество отвара получилось меньше, чем Вы рассчитывали, доведите его до нужного объема долив необходимое количество воды (используется обычная вода из-под крана).

Получившийся отвар переливаем в небольшую емкость,

Ставим на газ, доводим до кипения и уменьшаем огонь.

Размешивая, снова доводим отвар до кипения.

Продолжая постоянно помешивать, добиваемся ПОЛНОГО растворения агара. Как только это произойдет - среда готова.

После приготовления, тут же разливаем готовую среду по чашкам Петри. (Чашки Петри сделаны из закаленного стекла, поэтому они не лопнут.)

Наливать среду, следует слоем 3-5 мм.

После этого накрываем чашки Петри,

И установив их одна на другую в какую-нибудь тарелку или блюдце, (так будет удобнее переносить их с места на место),

Ставим в скороварку (или кастрюлю),

И стерилизуем в течение 1 часа.

Питательная среда из картофельного отвара

Состав: Картофельный отвар -100 мл; агар - 1,5 г.

Процедура приготовления

Берем 150 г картофеля,

Тщательно отмываем его от земли,

Не очищая, нарезаем кубиками ~1х1 см,

Высыпаем в емкость,

Заливаем 500 мл воды (используется обычная вода из-под крана),

Ставим на газ,

Доводим до кипения,

Делаем маленький огонек, и варим в течение 30 минут.

За это время часть воды выкипит, а оставшаяся часть окрасится в светло-желтый цвет.

Полученный отвар, так же необходимо профильтровать.

С готовым отваром, поступаем точно так же, как и в предыдущем случае.

Изготовление инокуляционной петли

Берем самую длинную, какую сможем найти иглу (замечательно подходит "набор игл для шитья кукол"),

Нагреваем докрасна,

И не очень сильно , расплющиваем молотком 1-2 см ее острия.

Должно получиться что-то подобное.

Зажав самый кончик иглы (5-7 мм) в тисках, загибаем его под прямым углом (буквой "Г"),

И слегка приплющиваем по бокам.*

*Это делается это для того, чтобы обеспечить лучший контакт инокуляционной петли при соприкосновении с поверхностью.

Теперь делаем ручку - оборачиваем противоположенный конец иглы изолентой.

В результате получается вот такая, (очень удобная для работы со спорами) инокуляционная петля.

Инокуляция

Аккуратно, стараясь не сдвигать крышки , вынимаем чашки Петри из остывшей скороварки, и откачиваем шприцем воду скопившеюся в блюдце.

Конденсат образовавшийся внутри, на крышках чашек Петри, опасности не представляет.

Работы по проведению инокуляции, должны проводиться в стерильных условиях! Для этого, все необходимые инструменты (инокуляционную петлю, скальпель, вату, спирт, горелку и т.д.), а так же приготовленные чашки Петри, переносят в помещение, которое затем, в течение некоторого времени* обрабатывают бактерицидной лампой.

*(30-60 мин., зависит от площади помещения и мощности лампы.)

Зайдя в помещение, расставляем инструменты так, чтобы нам было удобно работать. Протираем спиртом все поверхности.

Инокуляционную петлю погружаем в спирт,

и прокаливаем ее докрасна над пламенем горелки.

Затем снова погружаем в спирт,

подносим к горелке, и тут же (пока горит спирт) несем петлю к чашке Петри.

Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), погружаем инокуляционную петлю в агар*.

*Это делается для того, чтобы инокуляционная петля стала липкой от оставшегося на ней расплавленного агара. (Так же, при этом происходит охлаждение инокуляционной петли до безопасной для спор температуры.)

Сразу же после этого, слегка приоткрыв пакетик с отпечатком, не касаясь его краев, соскребаем инокуляционной петлей часть спор*.

*Если отпечаток хорошего качества, достаточно едва коснуться петлей, чтобы к ней прилипли тысячи спор. Если отпечаток совсем бледный, можно основательно поскрести острым концом инокуляционной петли по бумаге, чтобы вместе с частичками бумаги наверняка захватить часть спор.

После этого, сразу же переносим инокуляционную петлю обратно к чашке Петри, и так же, слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), касаемся поверхности агара в нескольких местах.

Если спор было достаточно много, они будут заметны на поверхности агара. Если спор было мало, на агаре останутся только следы от контакта с инокуляционной петлей. В любом случае, споры попали на питательную среду, в благоприятные условия, и через несколько дней должны прорасти.

Обязательно подписывайте свои чашки Петри (название вида, дату инокуляции и т.д., все, что считаете нужным), иначе потом Вы запутаетесь, что, где растет.

Теперь, чашки Петри необходимо обернуть пищевой пленкой. Это делается для того, чтобы предотвратить проникновение в них посторонних микроорганизмов.

Накладываем пленку поверх чашки Петри,

поднимаем чашку Петри, опуская при этом пленку

и обрезаем ее с небольшим запасом.

Теперь стягиваем края пленки вниз по всему периметру чашки Петри,

и закручиваем их (как фантик).

Закрученные края плотно прижимаем рукой

и в таком виде, убираем чашки Петри в темное, теплое (23-27С) место, на весь период инкубации.

Инкубация

Через 3-10 дней (в зависимости от количества и качества спор) споры прорастают - в местах инокуляции появляется белый пух мицелия.*

* Мицелий любого другого цвета, или консистенции, (например пленка, или слизь) является явным признаком заражения и должен быть немедленно удален.

Через несколько дней, очагов мицелия становится больше, и он продолжает разрастаться.

Очаги мицелия могут появляться не только в местах, контакта с инокуляционной петлей, но и по всей поверхности агара. Это происходит потому, что пока Вы совершали манипуляции внутри чашки Петри, некоторые споры упали с инокуляционной петли сами по себе, и теперь они проросли. Так же, споры могли переместиться в результате движения жидкости (упавшие капли конденсата).

Если во время инкубационного периода, заражения среды посторонними микроорганизмами не происходит, через 3-4 недели, мицелий полностью осваивает поверхность агара.

Хранение культур

После того, как мицелий полностью освоит поверхность агара, чашки Петри убирают на хранение в холодильник. При температуре +3-5С процессы жизнедеятельности мицелия замедляются, и он может сохраняться в таких условиях несколько лет. В течение этого времени мицелий постепенно поедает питательную среду, поэтому, чем толще был ее слой, тем дольше мицелий сможет питаться.

По мере надобности, чашки Петри с мицелием достают из холодильника и отрезают кусочки агара для проведения инокуляции*, или для пересадки культуры на свежую питательную среду.**

*Для проведения инокуляции отрезают небольшой (~ 1х1 см) кусочек агара с мицелием и помещают его в емкость с субстратом. Через несколько дней мицелий перебирается на субстрат и постепенно осваивает его целиком. Фото работ по проведению инокуляции кусочками агара, можно посмотреть в иллюстрированном руководстве по выращиванию грибов .

Поскольку для проведения одной инокуляции, достаточно малюсенького кусочка агара, одной 100 мм чашки Петри, хватает на проведение 20-30 инокуляций.

**Такой метод хранения, называется "метод вегетативных пассажей ", он позволяет сохранять полученную культуру практически в неизмененном виде. Чем реже происходит пересев, тем меньше клеточных делений претерпевает культура и тем ближе она по своим свойствам к исходному изолянту. Пересадку мицелия на новую среду, в этом случае, рекомендуется проводить не чаще одного раза в год.

Для длительного хранения культур, удобно использовать пробирки со скошенным агаром. Готовую среду разливают по пробиркам, закрывают их ватно-марлевой пробкой, и после стерилизации, пока агар не застыл, устанавливают в наклонном положении - скашивают агар. После того как агар застынет, пробирки инокулируют мицелием, дожидаются полного обрастания поверхности агара, и убирают на хранение в холодильник.

Длительность хранения при этом, достигается за счет уменьшении площади роста мицелия и увеличении толщины питательного слоя (по сравнению с чашкой Петри).

Выделение чистой культуры*

* Чистая культура - это клетки микроорганизмов одного вида. (В нашем случае, это мицелий культивируемого гриба).

Если во время роста мицелия, произошло заражение среды посторонними микроорганизмами, необходимо как можно быстрее отделить чистый мицелий, от конкурирующей микрофлоры. Это можно сделать двумя способами.

1. Удаление очага заражения

В случае "точечного заражения", (когда очаг заражения небольшой и локализован в одном месте), его проще вырезать и выбросить, оставив не тронутой основную часть мицелия.

Работы по выделению чистой культуры, должны проводиться в стерильных условиях!

Берем чашку Петри, в которой произошло заражение,

входим с ней в стерильное помещение, протираем все поверхности спиртом, погружаем скальпель в спирт, прокаливаем его над пламенем горелки, снова погружаем в спирт, подносим к горелке, и тут же (пока горит спирт), несем его к чашке Петри.*

Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), вырезаем скальпелем кусок агара, с растущей на нем плесенью,

подцепляем его кончиком скальпеля и удаляем.

Чашку Петри с удаленным очагом заражения оборачиваем пищевой пленкой и убираем в темное, теплое место, на весь период инкубации.*

*Смотри фото аналогичных действий при проведении инокуляции.

Если заражения посторонними микроорганизмами не произойдет, через некоторое время (зависит от того, на какой стадии роста мицелия произошло удаление очага заражения), мицелий полностью освоит поверхность агара.

2. Пересадка мицелия

В случае, когда посторонняя микрофлора занимает значительную часть, и вырезать ее не представляется возможным, из зараженной чашки Петри извлекают кусочек агара с чистым мицелием, и пересаживают его на новую среду в другую чашку Петри.

Берем чашку Петри, в которой произошло заражение, входим с ней в стерильное помещение, протираем все поверхности спиртом, погружаем скальпель в спирт, прокаливаем его над пламенем горелки, снова погружаем в спирт, подносим к горелке и тут же (пока горит спирт) несем его к чашке Петри.*

*Смотри фото аналогичных действий при работе с инокуляционной петлей.

Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), вырезаем скальпелем кусочек агара с чистым мицелием,

подцепляем его кончиком скальпеля

и переносим на новую среду, в другую чашку Петри.

Чашку Петри накрываем, подписываем, оборачиваем пищевой пленкой и убираем в темное, теплое место на весь период инкубации.*

*Смотри фото аналогичных действий при проведения инокуляции.

Через несколько дней, пересаженный кусочек опушится мицелием, а еще через несколько дней мицелий переберется на новую среду. Если заражения посторонними микроорганизмами не произойдет, через 3-4 недели, мицелий полностью освоит поверхность агара.

Сбор урожая

Итак, из вашего чудо туба вылезло долгожданное полкило, что дальше?

Если вы растите из мультиспора, очевидно, что грибы будут разного размера и степени зрелости. Во многих руководствах написано, что всю волну надо убирать за раз, т. к. нераскрывшиеся грибы после якобы шока перестанут развиваться и т. п. На самом деле это не совсем так. Ну вот представьте себя на месте грибов: раскинули вы свою сеть, начали переть в рост, а тут набежали слоны/коровы/жуки и пожрал/потоптали некоторых из вас. Глупо из-за этого переставать расти по всей своей сети. Задача выжить, как и у всего живого. Поэтому собирать волну можно не за раз.

Момент, на котором гриб готов к сбору, для каждого различен. Если нужны принты, то естественно нужно ждать раскрытия шляп. Если принты не нужны собирать можно нераскрывшиеся. Кто был в голлашке, заметили, что свежие кубы там продают в состоянии с нераскрывшейся шляпой. Я обычно собираю тогда, когда вуаль еще не разорвалась, во-первых это снижает количество полученных грибов (да, да бывает и такое), во-вторых потенция таких грибов чуть больше, чем у грибов с открывшейся шляпой.

Ждем до того момента когда самые ранние грибы первой волны достигнут желаемого размера. Обычно это 5-8 грибов большого размера. Аккуратно собираем их, стараясь не тревожить остальных. Если что-то тащится с ними, убираем это тоже.

Потом закрываем туб как было и ждем еще несколько часов (от 3 до 18) собирая походу то что достигает нужного состояния. Естественно те грибы, которым суждено было абортнуться, не ждем до упора. Тех кто ростом не вышел (из отдельных микроколоний) тоже не ждем. Через максимум 18 часов блок нужно подчистить.

Во время начального пиннинга образуются примордии для обеспечения первых двух волн, поэтому полностью почистить блок, равносильно, для рачительного грибовода, удару себе серпом по яйкам.

Удалять нужно грибы, которые имеют ярковыраженную ножку и шляпку, и которые по цвету темнее (начали проявлять признаки деградации). Если вы видите грибочек, но он имеет еще близкую к яйцеобразной форму, его не трогайте, из него весьма вероятно выйдет большой красивый гриб второй волны. Поможет наметать глаз на то что стоит убирать, а что нет только практика и фото, которые пока не сделаны.

Эксперементальный блок с абортами

А что если не чистить блок вообще? Не ну правда, уборка урожая тратит время и силы, а завтра еще вставать рано может ну его, а?

Сказано-сделано. Прет вторая волна, неубранные аборты деградируют, темнея, синея и

теряя свежесть. Многие из них опушаются у ножек. Многие поглощаются мицелием,

Глава: Сбор урожая

пушащимся снизу ног грибов второй волны. Снимаю вторую волну. Маленькие аборты первой волны к этому времени выглядят совсем не бодро. Их маленькие тела скукожываются и начинают сгибаться под собственным весом. Несмотря не не бодрый вид, никакой контаминации не наблюдается и принимается решение регидрировать блок перед третьей волной в том же виде как он есть, не почищая. Блок окончательно переходит в категорию экспериментальных.

После 6 часов регидрации блок вынимается из туба, и отправляется в выжиматель на подставку. Все что из него торчит выглядит стремно, размокшие отмирающие аборты местами похожи на куски серой слизи прилипшие к субстрату. 3-4 дня блок тупит, и ничего не происходит, на 5й день он начинает слегка пушиться мицелием. Пух нарастает на абортах тоже, хотя и не съедает их полностью, местами начинают лезть новые пины их пока не много, но по их виду можно понять, что они выйдут крупными.

Всего блок прожил 5 волн, и был выкинут, но не потому что контаминировал, а потому что сильно уменьшился в размерах и пересох.

Мораль этой истории такова, что если вы растите не на чистом зерне сильно блок можно не подчищать. Единственный момент, что после второй волны блок переезжает в пространство без стенок, в пакет, а потому, влага имеет возможность испаряться со всей поверхности блока. Те аэрация присутствует одинаково со всех его сторон. Если оставить блок в контейнере после 2й волны, можно получить загнивание абортов по краям и внизу контейнера.

Моя теория такова. Т. к. грибы стремятся выжить, они будут использовать для этого любой ресурс. И я считаю, что для них вполне реально и приемлемо захавать собственные отмирающие части, с целью пополнения собственного запаса. Думаю именно этим они занимаются, пока блок тупит после регидрации.

Снятие, сушка и хранение

Много написано о том, как снимать грибы с блока. Кто-то пишет срезать, кто-то выкручивать, кто-то раскачивать. Я за все способы кроме срезания с оставлением пеньков обычно я либо выкручиваю если гриб одиночный, либо вырываю предварительно раскачав в стороны, если грибы растут в связке или пучком. Единственное за чем надо следить, чтоб все, что тянется вместе с грибом, извлекалось тоже. Т. е., если у вас с грибом оторвался кусок мицелия, не нужно пытаться приделывать его обратно, думая что он прирастет и т. п.

Перед сушкой грибы нужно почистить от остатков субстрата. Это тоже делается как угодно, можно скоблить или отрезать, не важно. Главная цель чистый от субстрата гриб.

Когда я был еще новичком в грибоводстве, я сушил свой скудный урожай всякими усложненными способами закрытые боксы с осушителями, прокаленным рисом и прочим. В какой-то момент я понял абсурдность всех этих затей и купил себе многоярусную электросушилку. Отдал за нее 1200 рубасов и забыл про весь гиммор. Сушу в режиме 30С с обдувом встроенным вентилятором. Сушка протекает около 24-30

Глава: Сбор урожая

часов. Сухие до состояния печеньки грибы убираются в бумажный пакет из макдака и затем в целлофановый пакет.

Длительность хранения

Для хранения я не использую холодильник, не вижу в этом смысла. Нет, ну серьезно, если у вас много грибов, нет смысла морочаться на тему того, что из них что-то там пропадет в небольшом количестве.

Тем более опыт говорит, что даже пролежавшие полтора года в негерметичной деревянной коробочке, при комнатной температуре, грибы сохраняют свою пручесть на высоком уровне. Я хорошо запомнил день, когда нашел эту нычку и решил ее потестить. Кинул грибы на весы, дисплей отразили цифру 5.5гр. Прикинув, сколько они лежали (а они потемнели и легко крошились, чуть ли не в пыль), я подумал, что они потеряли свою силу чуть меньше чем полностью.

Не надеясь на их работоспособность, я растер их, вточил запив водичкой и пошел в Ашан купить что-нибудь на завтрак. Было чудное солнечное утро. Одев очечки потемнее я топал к магазу. Почти дойдя до пункта назначения, я начал ощущать знакомые шевеления восприятия. Оценив их, как незначительные, я вошел в Ашан и, взяв тележку для продуктов, стал лазить по рядам. В какой-то момент я ощутил, что потащило меня очень неслабо. В отделе сыров я понял, что забрало меня не по-детски: прилавки дышали, а надписи на ценниках никак не собирались в читаемые. Самого меня прилично штормило, и люди от меня стали шарахаться.

Оценив ситуацию, я понял, что тележка с продуктами мне больше нафиг не нужна, и одна только мысль о том, что мне придется стоять в очереди на кассу и расплачиваться с кассиром казалась мне нереальной затеей.

В ушах появился нарастающий гул, в котором можно было разобрать десятки разных голосов, но было ощущение того, что все они говорят на разных, непонятных мне языках. Атмосфера начала давить, людские массы огибаюшие меня со своими тележками и корзинами сливались в один потребительский поток, невероятно толстая тетя заорала справа от меня, но такое чувство что прямо мне в ухо: "Возьми-ка Кока Колы!" Слева от меня еще более громадный дядя, судя по всему ее муж, с остервенением начал загружать в свою тележку 2 упаковки колы по 6-ть 2-литровых бутылок. В один момент мне стало душно, я прикинул сколько это семейство пьет этой гадости, понял откуда весь их жир. Мне стало противно, в один момент мне в нос ударил удушливый запах пота, доносящийся от толстого мужика с Кока Колой. К горлу поступил ком, и меня затошнило.

"Надо валить отсюда" – пронеслось в голове. Резко сорвавшись с места, я двинул к выходу, сдерживая рвотные позывы. Я рвал из Ашана, как праведник-натурал рвал бы из Садома и Гаморы.

Вырвавшись на улицу я сделал несколько цикл глубоких вдохов-выдохов, заметил что тошнота отступила. В этот момент я оценил глубину трипа, я смотрел на плитку которой выложена территория перед торговым центром и не мог уцепиться вниманием ни за

Глава: Сбор урожая

одну деталь покрытия. Незатейлевый, обычно естественный узор на плитке жил своей собственной жизнью. В какой то момент мне казалось, что мой рост увеличиваеся, в другой вроде как уменьшается. Пытаясь стабилизировать изображение, я всматривался в пол. Тут я почувствовал некоторое неудобство, какое-то давящее чувство сзади. Я оглянулся и увидел компанию ребяток, стоящих неподалеку и с весельем меня разглядывающих. Тут мне пришло в голову, что я создаю нереальное палево, стоя чуть наклонившись над полом и втыкая в плитку, слегка водя головой пытаясь рассмотреть узоры на плитке. Я понял, что кто-то где-то ошибся, и лежащие долго грибы не так уж сильно теряют в активности. Быстро прикинув расклад при котором я точнул 5.5 сухими и пошел в Ашан, мне стало очень смешно. Тут мои мысли перескочили на то, что я до сих пор стою на том же месте и втыкаю, только уже не на плитку, а на компанию ребяток. Причем ребятки уже отсмеялись и начали поёрзывать, не понимая что там у меня в голове на тему их компании вертится.

Я развернулся и пошел прочь от этого места. По дороге я завис на лавочке одной из малолюдных алеек.

Пару раз меня неслабо выкидывало из этого мира в другие. Трип вышел более чем хорошим и сильным. Вывод, который я сделал на практике, таков: если грибы сохранили сухость и хранились меньше 1.5 лет, не стоит думать что они ослабли или не активны. Будьте аккуратны!

Глава: Сбор урожая

Снятие спорового отпечатка

Хорошо когда есть принты, и плохо когда их нет. Я хорошо помню время, когда у меня не было принтов, и как я рвал жопу, что бы разжиться посадочным материалом. Первый мой принт пришел мне от пользователя с ником BT5, за что ему моя благодарность. Увы, не суждено было вырасти грибам из этого принта (а точнее из присланной половинки принта). Неумеренный энтузиазм и кривые руки сделали свое черное дело, и я вернулся в ту точку, с которой начинал. Второй принт пришел ко мне не посредством данного форума, а окольными путями через знакомых знакомых, моих знакомых. Подготовив все необходимое, я начал распечатывать принт, для соскабливания его в рюмку для изготовления споровой взвеси. То что я обнаружил внутри неаккуратно скомканой фольги, очень сильно удивило меня и расстроило. Там была непонятная каша из спор и какой-то мерзко пахнущей слизи. Естественно не имея больше ничего, я на удачу загнал все это в шприц и инокулировал зерно. Естественно все было очень быстро и феерично просрано. Потом я попытался два раза заказать споры из-за бугра, но увы буржуины наеб...ли нашего брата, и ничего не пришло. Принт я так и не получил, но зато приобрел замечательного друга с которым в последствии был до его смерти. Пользователь Unambo (забавно если прочитать его ник наоборот то получиться obmanU, как он любил говорить "обману наоборот", и реально он был очень честным и порядочным человеком) согласился встретиться со мной на одной из станций метро, и передал мне банку сена, обросшего мицелием. Это была Камбоджа, и это были первые грибы, которые выросли в моих на то время кривых руках. Первые принты, которые я делал, не отличались продуманностью и дизайном, сейчас я назвал бы их уебищ..ыми.

Сейчас я понимаю, что принт помимо того, что должен содержать споры, должен быть еще чистым, грамотно снятым, удобным для извлечения с него спор, с умом запакованным и обязательно подписанным.

Для снятия отпечатков я использую фольгу для гриля, она толстая, крепкая, с ней удобно работать как до снятия принтов, так и при извлечении спор для своих нужд.

и для снятия одного-двух отпечатков.

1. Из толстой фольги вырезаете полосу, шириной примерно на 3 см больше диаметра шляпки гриба, а длиной как две ширины. Те для шляпки гриба диаметром 5 см размер прямоугольника фольги будет 8х16 см.

2. Готовим емкость с крышкой. Я использую емкость как от монотуба. У нее есть крышка и ее площадь достаточна для снятия достаточного количества отпечатков. Емкость протереть спиртом изнутри.

3. Ватным тампоном на гладкой поверхности протираем с обоих сторон полосы фольги. Протирать надо с нажимом, чтоб тщательно разгладить полоски фольги, они должны быть идеально ровные.

4. На внутреннюю часть перевернутой крышки разложить полоски фольги, еще раз протереть их спиртом и накрыть емкостью.

Теперь, когда для снятия принтов все готово, нужно выбрать плодовое тело. Есть много различных теорий на тему того, с каких плодовых тел нужно брать отпечатки. Одни говорят, что берите с самых больших грибов, другие говорят, берите с грибов 3-й волны, типа там самые "спелые" споры, кто-то вообще советует не морочатся и снимать с любого гриба. Кто-то снимает споры с только-только раскрывшихся шляп, а кто-то ждет пока поля шляпки не выгнуться вверх. Лично я придерживаюсь мнения о том, что чем более молодой мицелий, и чем жирнее принт тем лучше. Поэтому рекомендую брать для принтов грибы с первой волны, и раскрывшиеся до состояния когда спороносные пластины еще не выпячиваются за край шляпки. Т. е., если удалить ножку прямо рядом со шляпкой и положить шляпку на поверхность, она будет лежать опираясь на свои края, а пластины при этом не будут касаться поверхности. Это позволит во-первых снизить количество всяких бонусов снаружи (т. к. под шляпку ничего не залетит в процессе спороношения), а во-вторых сконцентрирует споры в один красивый отпечаток, и ничего за края шляпки не повылетает.

5. Снимите выбранный гриб с субстранного блока, уприте шляпку в чистую поверхность. Протертой спиртом бритвой (я использую бритвы типа рапира, как для советских бритвенных станков) аккуратно срежте ножку под самой шляпкой, так чтоб оставшийся "пенек" не выступал за уровень краев шляпки если ее положить спороносными пластинами вниз.

6. Чистым пинцетом аккуратно возьмите шляпку и положите ее на одну из подготовленных полосок фольги, так чтоб она занимала примерно середину половины полоски. Идея в том, что полоска будет сложена вдвое, и по центру одной из частей будет распологаться принт.

7. Повторите с другими шляпками.

8. Теперь, когда все шляпки разложены на полосках фольги, спрысните слегка из пуливелизатора ёмкость, которой накроете все это. Накройте и забудьте на 12 часов.

Вопрос, зачем прыскать емкость водой? Все очень просто. Я думаю, многие сталкивались с тем, что с отличных грибов получаются жидкие отпечатки или же они вообще не сыпят споры на носитель. Происходит это потому, что сыпать споры гриб может только при достаточной влажности. Как только гриб теряет связь с блоком, а шляпка теряет связь с ножкой, шляпка становится очень предрасположена к высыханию. Помните о том, что колонии мицелия образующие плодовое тело являются живыми и для "работы" им нужна повышенная влажность. Попробуйте и убедитесь в том, что при спороношении на носитель, увлажнение воздуха серьезно повышает эффективность процесса. Те кто видели мои принты, смогут подтвердить, что принты даже с небольших шляпок очень жирные. И могут быть использованы многократно.

9. Когда время прошло, приготовьте иголочку, протертую спиртом и откройте емкость.

Глава: Снятие спорового отпечатка

10. Подцепляя иголочкой край шляпки аккуратно подкиньте ее так чтоб она улетела с фольги не смазав принт.

11. Проделав это со всеми шляпками, закройте емкость и дайте принтам подсохнуть минут 10.

Это делается для того, чтобы остаточная влага не стала причиной порчи принта при хранении (там может даже вырасти слизь).

12. Сложите полоску фольги пополам по широкой стороне, прогладьте пальцем сгиб

13. Загните на одну сторону края полоски по сторонам, которые до складывания пополам были длинными на 0.5 см. Прогладьте сгибы

14. Загните на другую сторону оставшийся незапечатанным край.

15. Принт готов, осталось убрать его на хранение в такую же полоску фольги, но большего калибра и подписать.

Как наверное бросается в глаза, полученные таким способом отпечатки не являются стерильными, они являются просто полученными в относительно чистых условиях. При переносе в шприц для инокуляции зерна я использую гентамицин 1мл на 10мл воды. Этого достаточно для того, чтоб не было косяков. При инокуляции агара, естественно шансы занести ненужную бяку повышаются, но там совсем другой принцип работы. Культура переносится чистыми кусочками размером с рисовое зернышко, и в самом начале роста. Стандартная выбраковка чашек в прямых руках обычно не превышает 15%. Скажу еще, что получить стерильные отпечатки целый гимморой, и технически это сложно. А еще сложнее сохранить их стерильность при хранении.

Принты на бумаге

Зашел тут на олечке разговор за принты на бумаге. Мол, не нравится мне фольга, хочу принты на бумаге. Как ее стерилизовать?

Я ответил: "утюгом блеа!" – смешно, не спорю. Но тем не менее, метод обкатанный. Правда, оставленный в прошлом, так как на бумагу давно не снимал. Итак, делаем стерильную бумагу для принтов.

Берешь лист обычный из принтера. Нарезаешь его под отпечатки. Потом берешь еще 2 листа и склеиваешь их по краям тонким скотчем. Кладешь внутрь получившейся "папки" нарезанную бумагу для принтов. Заклеиваешь точно так же скотчем. Получается почти герметичный конверт.

Потом кладешь на ровную твердую поверхность и хуячишь на максимуме утюгом с попутным пропариванием струей пара. Пара минут и стерильная бумага под принты готова.

Глава: Снятие спорового отпечатка

Контаминанты

Любой грибовод со стажем скажет вам, что за свою жизнь выкинул много киллограммов зерна и прочих субстратов. Это нормально, и не стоит по этому поводу расстраиваться и опускать руки. Даже у супер махровых грибоводов проеб в 10-15% является нормой. Все зависит от потенциальной сложности и рисковости операции. Самый большой процент факапа стоит за такими операциями как g2g (инокуляция зерна на зерно) и агаровые трансферы.

Процент потерь тем больше, чем более масштабны объемы вашего хобби. Большие объемы субстрата требуют перемены подхода к грову, одно дело вы работаете с субстратом большой ложкой протертой спиртом, и совсем другое дело, когда у вас в руках садовые вилы или совковая лопата. Объем потенциальных претендентов на поедание пары кубов вашего чудесного компоста естесственно будет выше. А процесс создания условий для пастеризации таких объемов субстрата будет сложнее.

Но вернемся к небольшим объемам. Хорошая новость в том, что тут можно добиться практически полного отсутствия проблем с конкурентными организмами. Другая новость, для этого придется применять актуальные технические решения, в том числе описанные в этой книге.

Необходимо так же очень хорошо и полной грудью вкурить в жизнь грибов. Нужно пробовать поставить себя на место грибов. Понять, как они растут, питаются, размножаются и как все это вяжется с условиями их обитания.

Многие вещи мне подсказали сами грибы, задачей сессии было узнать о жизни грибов, которые я вкушаю. Во время сессии меня сопровождала полностью обросшая банка мицелия. Очень сильный опыт, рекоммендую. Рассматривайте их и общайтесь с ними вопросами в уме, эмпатически. Попробуйте отождествить себя с ними, побыть ими, побывать там, где они растут.

Конкуренция за ресурсы в мире микроорганизмов требует опредененных особенностей размножения. Оно должно быть быстрым, а количество производимого потомства высоким. И на деле так оно и есть. Чем проще организм, тем быстрее его жизненный цикл. Соответственно, низшие грибы всегда будут расти быстрее, чем высшие. Кубенсис, естественно, относится к высшим грибам, а конкуренты: некоторые к высшим (но более простым), некоторые к низшим. Задача культиватора создать условия, при которых создается фора, для того чтоб его подопечные успели занять субстрат первыми.

Стерильность того же зерна в банке не является абсолютной величиной. Со временем она падает, какая бы хорошая барьерная защита не стояла. Хорошая новость в том, что банки с защитой описанной в этой книге позволяют держать напор контаминатов, как минимум 8 недель (если только зараза не была внесена в банку самим оператором).

Глава: Контаминанты

Скорость размножения у конкурентов поистине велика, те, кто уже имел неудачные опыты, по достоинству оценили то, как бодро колонизирует банку триходерма или ниггер. Эх, такие бы показатели скорости кубам...

Многие простейшие грибы попросту не образуют плодовых тел. Допустим триходерма, относящаяся к роду гифомицетов. Они образуют кондиеносцы (особые вертикальные выросты из мицелия) с которых происходит раскидывание их спор (кондиев). На их формирование уходит мало времени, а спороношение обильное. В закрытом пространстве и при повышенной температуре триходерма распространяется со скоростью лесного пожара. Особенно этому способствует наличие в субстрате областей с анаэробными условиями. При анаэробных условиях в субстрате образуется ряд органических кислот, являющихся для триходермы самой нямкой.

Триходерма

На примере триходермы становится понятно, что правы были полководцы, говоря: "Знай своего врага". Имея представление о конкурентах, легче с ними бороться.

В природе триходерма является почвенной бактерией, а соответственно занести ее с покровным слоем содержащим землю очень просто. При недостаточной стерилизации кейсинга шансы завести себе нового "друга" очень велики. Если в субстрат добавлен буффер с основной реакцией, например гипс, это естественным образом препятствует появлению триходермы (в разумных пределах, конечно же).

При первых же признаках появления триходермы не без сожаления выкидывайте кейк, а то пространство в котором он стоял, подвергайте тщательнейшему санированию с применением самых жестких методов. Доместос в помощь! Никогда не ждите пока она размножится, выкидывайте СРАЗУ! Этот вид производит множество очень мелких и живучих спор. Однажды поплодоносив в вашем парнике, она может стать причиной длинной полосы разочарований от заражения ею. Если вы все еще используете парник с керамзитом или перлитом, то либо замените их на новые, либо замочите старый в растворе доместоса или иной хлорсодержащей жидкости.

Если вы используете парники или монотубы с фильтрами, все это тоже обработать хлоркой, а фильтры обязательно замените на новые.

Никогда не открывайте банки пораженные триходермой там где происходит гров. Для утилизации пораженного зерна сначала приоткройте банку и залейте ее горячей водой, только после этого можно начинать вытряхивать ее в унитаз. Это же правило распространяется на любую зараженную банку. Спороносящие организмы распростроняются главным образом по воздуху, заливая банку водой, вы осаживаете споры и они не разлетаются по ванной или туалету. Естественно небольшая их часть один

Глава: Контаминанты

фиг вылетает, поэтому старайтесь быть при вытряхивании по минимуму одеты (споры цепляются на одежду в большом количестве), а сразу после удаления банки вымойте руки по локоть антибактериальным мылом.

Анаэробные условия для контаминантов

Во многих руководствах и постах пользователей можно встретить упоминания о том, что во время колонизации грибам практически не нужен свежий воздух. Это не совсем так, и есть огромная разница, между повышенным содержанием углекислого газа и отсутствием кислорода.

Для понимания этой разницы нужно попробовать поставить себя на место грибов. Большинство любимых нами грибов проводит свой жизненный цикл в верхних слоях плодородного слоя земли. Обычно глубина их обитания это примерно до 15 сантиметров вглубь. Все что глубже не имеет необходимых условий для их роста.

В зависимости от компонентов образующих плодородный слой почвы его аэрация будет различной, и естественно будет ухудшаться с увеличением глубины.

Условием для плодоношения кубенсиса является появление постоянного воздухообмена.

Под постоянным воздухообменом я понимаю организацию одновременного притока кислорода и отвода углекислого газа. Для стадии колонизации организация оттока углекислого газа не нужна, а вот приток кислорода необходим. Теперь, надеюсь, разница понятна. Т. к. углекислый газ тяжелее воздуха, он стелется по поверхности субстрата, и остается в банке или контейнере, даже если отверстие воздушного фильтра будет большим, поэтому не страшно, если дырка для вентиляции банки будет хоть 3 сантиметра в диаметре, страшно если она будет меньше 8мм. Естественно, чем больший объем субстрата используется, тем больше ему требуется кислорода. И если речь идет о контейнере на 3 литра, то одним отверстием в 8мм как в крышке банки, не обойтись. Помимо того, что воздух нужен грибам для роста, он нужен так же для предотвращения создания анаэробных условий, при которых развитие патогенной микрофлоры будет вопросом короткого промежутка времени.

Особенно актуален и критичен вопрос притока кислорода при колонизации, при использовании синтетических субстратов на основе кокосового волокна. Т. к. фракция его довольно мелкая, а способность удерживать воду высока, для обеспечения достаточной аэрации слой субстрата не должен быть толще 15 см (лучше и того меньше), а вентиляционные отдушины достаточного размера. Естественно, инкубация должна проходить там, где воздухообмен свободный, иначе от отдушин не будет толку.

Отсутствие анаэробных зон в субстрате является одним из важных факторов, которые частично решают проблемы контаминации многими видами бяк.

Глава: Контаминанты

Иногда для точной идентификации гриба необходимо узнать цвет спорового порошка. Почему мы говорим о «споровом порошке», а не о цвете спор? Одну спору невооруженным глазом не рассмотреть, но если они насыпались массово, порошком, то их видно.

В зарубежной литературе используется термин «spore print», короткий и ёмкий. Перевод получается длиннее: «отпечаток спорового порошка», слово «отпечаток» тут, возможно, не совсем корректно, но оно прижилось и используется.

Прежде чем начинать процедуру получения «spore print» дома, внимательно рассмотрите грибы в природе, прямо на месте сбора. Взрослые экземпляры щедро рассыпают вокруг себя споры — это естественный процесс размножения, ведь грибы, а вернее, их плодовые тела, растут не для того, чтобы попасть в корзинку грибника: в них вызревают споры.

Обратите внимание на цветную пыль, покрывающую листву, траву или землю под грибами — вот это оно и есть, споровый порошок.

Примеры, вот розоватый порошок на листе:

А вот белый порошок на листе под грибом:

Грибы, растущие близко друг к другу, обсыпают спорами шляпки своих низкорослых соседей.

Однако в природных условиях споровый порошок уносится ветром, смывается дождём, бывает затруднительно определить его цвет, если он насыпался на цветной лист или яркую шляпку. Приходится получать отпечаток спорового порошка в стационарных условиях.

Ничего сложного в этом нет! Вам потребуется:

бумага (или стекло), куда будем собирать порошок
стакан или чашка, чтобы накрыть гриб
собственно, сам гриб
немного терпения

Чтобы получить «spore print» дома, вам нужно взять относительно зрелый гриб. Грибы с нераскрывшимися шляпками, или слишком молодые, или грибы с сохранившимся покрывалом — не годятся для получения отпечатка.

Мыть гриб, выбранный для получения «spore print», не рекомендуется. Аккуратно отрежьте ножку, но не под самую шляпку, а так, чтобы можно было на этот обрезок поставить шляпку максимально близко к поверхности бумаги, но чтобы пластины (или губка) не касались поверхности. Если шляпка слишком большая, можно взять небольшой сегмент. Верхнюю шкурку можно смочить парой капель воды. Накрываем наш гриб стаканом, чтобы исключить сквозняки и преждевременное высыхание шляпки.
Оставляем на несколько часов, лучше — на ночь, при обычной комнатной температуре, ни в коем случае не в холодильнике.
Для навозника этот срок можно уменьшить, у них всё происходит слишком быстро.

Для относительно молодых грибов может потребоваться сутки и даже более.
В моём случае только через двое суток удались получить отпечаток такой интенсивности, что можно разобрать цвет. Качество получилось не очень, однако помогло чётко идентифицировать вид, порошок не розовый, значит, не энтолома.

Когда будете поднимать шляпку, будьте осторожны, не сдвиньте её, не смажьте картину: споры без движения воздуха падали вертикально вниз, так что мы увидим не только цвет порошка, но и рисунок пластинок или пор.

Вот, собственно, и всё. Мы получили отпечаток спорового порошка, можно фотографировать для определения или просто «на память». Не смущайтесь, если с первого раза не получилась красивая картинка. Главное — цвет спорового порошка — мы узнали. А остальное приходит с опытом.

Остался неоговоренным ещё один момент: какого цвета бумагу лучше использовать? Для светлого «spore print» (белый, сливочный, кремовый) логично использовать чёрную бумагу. Для тёмного, понятно, белую. Альтернативный и очень удобный вариант — делать отпечаток не на бумаге, а на стекле. Тогда, в зависимости от полученного результата, можно рассматривать отпечаток, меняя фон под стеклом.

Аналогичным образом можно получать «spore print» для аскомицетов («сумчатых» грибов). Следует учесть, что аксомицеты разбрасывают споры вокруг себя, а не вниз, так что накрываем их ёмкостью пошире.

Приготовление спорового отпечатка

Для изготовления спорового отпечатка, лучше всего брать грибы со второй, или с третьей волны плодоношения. Их как правило, вырастает значительно меньше чем в первой волне, и поэтому не нужно мучаться выбором, оставить ли собранные грибы для употребления, или использовать их для получения спор. К тому же, как показывает практика, именно у грибов со второй и третьей волны, получаются самые жирные отпечатки.
Выбирать, следует крупные грибы с более темной, чем у остальных грибов шляпкой. Грибы с темной шляпкой, как правило, производят больше спор, чем остальные. А выбирая крупные экземпляры, вы тем самым отбираете с потока самые полноценные, здоровые грибы. Помните, что отбирая грибы по тому, или иному признаку, вы производите селекцию, в результате которой, последующие поколения грибов могут иметь все те признаки, по которым производился отбор.
Шляпка гриба, к моменту сбору спор должна полностью раскрыться, и часть спор к этому времени, уже может начать высыпаться. Гриб, продолжает производить споры довольно долгое время (2-4 дня), поэтому можно не бояться, что высыпавшиеся споры, повлияют на качество отпечатка. Напротив, начавшие высыпаться из шляпки споры, являются явным подтверждением того, что гриб начал производить споры, и что споровый отпечаток удастся получить в любом случае.
Все операции по приготовлению спорового отпечатка, необходимо проводить в стерильных условиях. Для этого необходимо обработать помещение бактерицидной лампой, или воспользоваться стерильным боксом.
Приготовить споровый отпечаток, можно практически на всем, что угодно –
на всем, что имеет плоскую поверхность, и с чем вам потом будет удобнее работать, и что будет удобнее хранить.
Чаще всего для этих целей, рекомендуют использовать кусочек плотной бумаги, фольги, или стекла.
Удобнее всего, делать отпечаток на плотной бумаге (например, на открытке) т.к. стекло или фольга не всегда подходят для этих целей. Например, стекло вы не сможете отправить по почте, а фольга, очень часто рвется во время инокуляции, при контакте с инокуляционной петлей.

Процедура изготовления спорового отпечатка сводится к следующему: Стерильный кусочек плотной бумаги (или чего-либо подобного), размером чуть больше шляпки гриба, укладывают в стерильную чашку Петри, затем берут гриб, используя стерильные ножницы (или скальпель) отрезают у него шляпку как можно ближе к спороносному слою (гименофору), и укладывают шляпку на бумагу спороносным слоем вниз. Затем чашку Петри закрывают, и убирают ее на сутки, куда-нибудь в темное место. За сутки, (ждать дольше не имеет особого смысла, т.к. созревшие споры, как правило, успевают высыпаться за это время, а новые споры гриб уже не производит) миллионы спор высыпаются из отрезанной шляпки образуя на бумаге пятно темно-фиолетового цвета (споровый отпечаток).
Цвет спорового отпечатка, всегда одинаковый для каждого вида грибов, и является важным признаком при его определении.
После того как споры высыпались, чашку Петри открывают, извлекают из нее шляпку гриба, а кусочек бумаги со споровым отпечатком, стерильным пинцетом помещают в подходящий по размеру, стерильный пакетик с застежкой (зип-локом) для его хранения.
Все операции по переносу спорового отпечатка из чашки Петри в пакетик, также, необходимо проводить в стерильных условиях.

Чтобы обеспечить стерильность пакетика, его необходимо протереть спиртом изнутри и снаружи, и позволить спирту испариться (если этого не сделать, остаткам спирта будет некуда деться в закрытом пакетике, и часть спор может погибнуть из-за контакта со спиртом). Стерильность чашки Петри, также достигается путем протирания ее спиртом, изнутри и снаружи. А кусочки бумаги, которые будут использоваться для приготовления отпечатка, удобнее всего стерилизовать в скороварке (или кастрюле), предварительно нарезав и поместив их в банку с закручивающейся крышкой. Стерилизацию проводят в течении 30-60 мин., после чего позволяют банке остыть до комнатной температуры. Стерильные кусочки бумаги, извлекают из банки стерильным пинцетом, непосредственно перед тем, как их использовать. Все инструменты перед проведением работ, также следует обрабатывать спиртом.

Вместо чашки Петри, можно использовать невысокую банку с закручивающейся крышкой. В этом случае, не следует герметично закрывать крышку – от этого, в банке создается повышенная влажность, в результате которой, споры прилипают к спороносным пластинкам и практически не высыпаются, или высыпаются очень плохо, образуя крайне бледные отпечатки.

Для приготовления отпечатка также, можно воспользоваться и «классической» технологией, используя вместо чашки Петри (или банки с закручивающейся крышкой) блюдце и рюмку. Но в этом случае, слишком велика вероятность нарушения стерильности отпечатка, из-за того, что уровень рюмки находится на одном уровне с бумагой, на которую высыпаются споры. К тому же, рюмка на блюдце – конструкция довольно неустойчивая, и во время переноса с места на место, рюмка очень часто сдвигается, или падает.

кое что уточню - в норме для получения жирного отпечатка требуется 12-24 часа. для того чтобы гриб охотнее сыпал споры за 15-20 минут до срезания шляпки обрызгиваются водой из пульверизатора. так же имеет смысл оставлять зазор в чашечке для испарения влаги со шляпки.
кстати стерильный принт - фантастика и парадокс.
хотя бы потому что шляпка гриба - умирающая органика со всем ее зоопарком